單克隆抗體技術中人工誘導小鼠脾細胞和骨髓瘤細胞融合后,細胞將以多種形式出現,如脾細胞-瘤細胞、脾細胞-脾細胞、瘤細胞-瘤細胞、細胞多聚體、未融合的脾細胞和瘤細胞等,其中只有脾細胞-瘤細胞的融合體是有用的.
正常的脾細胞在培養基中存活僅5-7天,無需特別篩選,細胞多聚體也容易死去,關鍵問題是要去除未融合的瘤細胞.選擇培養基具有3種關鍵成分：次黃嘌呤（hypoxanthine）、氨甲蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶核苷（thymidine）,故名HAT培養基.這個培養基通過抑制瘤細胞的核苷酸合成,達到去除未融合瘤細胞的目的.
細胞有兩條基本途徑合成嘌呤核苷酸,一條是從磷酸核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物開始,葉酸是重要的輔酶,而氨甲蝶呤是葉酸的拮抗劑,可阻斷瘤細胞通過這一途徑合成核苷酸.另一條途徑是利用已存在的堿基,經特異的磷酸核糖轉移酶催化合成核苷酸,如次黃嘌呤經過次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT）轉變為嘌呤核苷酸.融合所用的瘤細胞是選擇出來的HGPRT缺陷細胞株,因此不能在HAT培養基中生長,而且不合成或不分泌免疫球蛋白.只有融合細胞具有親代雙方的遺傳性能,可在HAT培養基中長期存活與繁殖并分泌抗體.
