1、培養基配選定
同種培養基配同著作某些差別除所用標準應嚴格按其規定進行配制外般均應盡量收集關資料加比較核再依據自使用目加選用記錄其源
2、培養基制備記錄
每制備培養基均應記錄包括培養基名稱配及其源各種份牌號終pH值、消毒溫度間制備期制備者等記錄應復制份原記錄保存備查復制記錄隨制培養基同存放、防發混亂
3、培養基稱取
培養基各種必須精確稱取并要注意防止錯亂完要斷配置于傍側每稱完種即配面軍做記號并所需稱取藥品取齊置于左側每種稱取完畢即移放于右側完全稱取完畢應進行檢查
4、培養基各份混合溶化
培養基所用化藥品均應化純使用蒸煮鍋銅鍋或鐵鍋防微量銅或鐵混入培養基使細菌易使用銹鋼萵加熱溶化放入燒杯或燒瓶置高壓蒸汽滅菌器或流蒸汽消毒器蒸煮溶化鍋溶化、先用溫水加熱并隨擾、防焦化、發現焦化現象、該培養基即能使用應重新制備待部固體溶化再用較火力使所完全溶化迄至煮沸瓊脂溶化用另部水溶化其兩溶液充混合加熱溶化程蒸發丟失水必須加補足
5、培養基pH初步調
培養基加熱消毒程、pH所變化培養基各完全溶解應進行PH初步調例牛肉浸液約降低pH0.2腸浸液pH卻顯著升高步驟操作者應隨注意探索經驗、期能掌握培養基終PH保證培養基質量PH調整應培養基煮沸數鐘利培養基沉淀物析
6、培養基濾澄清
液體培養基必須絕澄清瓊脂培養基應透明顯著沉淀 須要采用濾或其澄清達項要求般液體培養基用濾紙濾濾紙應折疊折扇或漏斗形避免液壓均勻引起濾紙破裂
瓊脂培養基用清潔白色薄絨布趁熱濾亦用間夾薄層吸水棉雙層紗布濾新制肉、肝、血土豆等浸液、則須先用絨布碎渣濾再用濾紙反復濾濾能達澄清要求、則須用蛋清澄清即冷卻至55~60°C培養基放入三角燒瓶內裝入量超燒瓶容量1/2每1000ml培養基加入1~2雞蛋蛋白強力振搖3~5鐘置高壓蒸汽滅菌器、121°C加熱20鐘、取趁熱絨布濾即
7、培養基裝
培養基裝應按使用目要求裝于試管、燒瓶等適容器內裝量超容器裝盛量2/3容器口用墊防濕紙棉塞封堵其外須用防水紙包扎（現試管般用螺旋蓋者）裝能使用半自或電定量裝器裝瓊脂斜面培養基裝量應能形2/3底層1/3斜面量洽裝容器應預先清洗干凈并經干烤消毒利于培養基徹底滅菌每批培養基應另外裝20ml培養基于玻璃瓶隨該批培養基同滅菌測定該批培養基終pH用
8、培養基滅菌
般培養基采用121°C高壓蒸汽滅菌15鐘各種培養基制備特殊規定即用滅菌
某些畏熱糖類應另行配20%或更高濃液濾或間歇滅菌消毒再用菌操作技術、定量加于培養基明膠培養基亦應用較低溫度滅菌血液、體液抗素等則應菌操作技術抽取加入于經冷卻約50°C左右培養基
瓊脂斜面培養基應滅菌立即取冷至55℃-60℃擺置適斜面待其自凝固
9、培養基質量測試
每批培養基制備應仔細檢查遍發現破裂、水浸入、色澤異、棉塞培養基沾染等、均應挑棄并測定其終pH
全部培養基放入36±1°C恒溫箱培養夜發現菌即棄
用關標準菌株接種1~2管或瓶培養基培養24~48菌或應追查原并重復接種結仍同前則該批培養基即應棄能使用
10、培養基保存
培養基應存放于冷暗處能放于普通冰箱內放置間宜超周傾注平板培養基宜超3每批培養基均必須附該批培養基制備記錄副頁或明顯標簽
